大肠杆菌发酵解决方案

培养基选择：

LB培养基(种子培养基) :胰蛋白胨5g,酵母粉2.5g,NaCl5g,溶于500mlH2O,NaOH调节pH7.0, 2L三角瓶装,灭菌锅湿热高压灭菌121℃, 20min,室温保存.  

TB培养基(发酵培养基) : 胰蛋白胨240g, 酵母粉480g, 甘油80g,消泡剂1ml, 溶于H2O, 定容至19L,B. Braun发酵罐在位灭菌121℃, 15min.

配制种子固体培养基：100mL，分装试管，0.1MPa 灭菌20min，然后摆成斜面。

配制种子培养液：1200mL，分装平均分装于三个500mL三角瓶中，同上灭菌。

培养方式：

  大肠杆菌发酵大多采用补料分批培养，这是在现代发酵工艺得到优化的一种方式，能有效的优化微生物培养过程中的化学环境。使微生物处于最佳的生长环境。这种方式一方面可以避免某些营养成分初始浓度过高出现底物抑制现象，另一方面能够防止限制性营养成分被耗尽而影响细胞的生长和产物的形成。补料分批培养已广泛应用于各种各样的初级、次级生物产品和蛋白等的发酵生产中。

    培养基营养成分过高会抑制细胞的生长，采用流加补料是提高细胞浓度和外源蛋白产量的有效方式，高密度培养通过调节限制性底物的流加速率来调控细胞生长。

培养条件：

1、温度：36~38 ℃

2、pH： 7

3、搅拌速率：100~200r/min

4、溶氧:   20~50%

5、通风：1:2VVM

6、接种量：1~2%

操作步骤：

1、菌种准备

2、上罐前的准备及实罐灭菌

3、发酵操作

4、发酵管理

5、发酵过程中各生化指标的测定

6、补料

7、放罐

8、清洗